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人硫氧還蛋白還原酶(TrxR)ELISA試劑盒是這樣操作的!

更新時間:2019-06-21      瀏覽次數:1026

人硫氧還蛋白還原酶(TrxR)ELISA試劑盒是這樣操作的!

 

硫氧還蛋白還原酶是一種NADPH依賴的包含FAD結構域的二聚體硒酶,屬于吡啶核苷酸-二硫化物氧化還原酶家族成員。硫氧還蛋白還原酶 thioredoxin reductase和硫氧還蛋白、NADPH共同構成了硫氧還蛋白系統.TrxR有很多生物學功能,與人類某些疾病的發病機制也密切相關。

由還原型 NADP催化硫氧還蛋白還原的酶。EC1.6.4.5.。含有一個分子的FAD。使氧化型硫氧還蛋白的胱氨酸殘基還原,變成一對半胱氨酸殘基,后者進一步成為核糖核苷酸還原的電子供體。它存在于大腸桿菌、酵母、肝臟以及腫瘤細胞中。 

實驗原理
本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中人硫氧還蛋白還原酶(TrxR)水平。用純化的人硫氧還蛋白還原酶(TrxR)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入硫氧還蛋白還原酶(TrxR),再與HRP 標記的硫氧還蛋白還原酶(TrxR)抗體結合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經過*洗滌后加底物TMB 顯色。TMB 在HRP 酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的硫氧還蛋白還原酶(TrxR)呈正相關。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度(OD 值),通過標準曲線計算樣品中人硫氧還蛋白還原酶(TrxR)濃度。

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實驗中需要注意:

1.試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30 分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應裝入密封袋中保存。

2.濃洗滌液可能會有結晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結果。

3.各步加樣均應使用加樣器,并經常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5 分鐘內,如標本數量多,推薦使用排槍加樣。

4. 請每次測定的同時做標準曲線,做復孔。如標本中待測物質含量過高(樣本OD 值大于標準品孔*孔的OD 值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(n 倍)后再測定,計算時請zui后乘以總稀釋倍數(×n×5)。

5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。

6.底物請避光保存。

7.嚴格按照說明書的操作進行,試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.

8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。

9.本試劑不同批號組分不得混用。

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